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质料乳取乳制品中三聚氰胺检测要领
作者:admin  泉源:本站  宣布工夫:2010-11-1 10:55:42  点击:62 www.2222.VIP
本尺度包孕三个要领:第一法高效液相色谱法,第二法液相色谱-质谱/质谱法,第三法气相色谱-量谱联用法,检测时,应凭据检测工具及其限量的划定,选用与其相适应的检测要领。

本尺度的附录A 为材料性附录。

本尺度由天下食品安全应急标准化工作组、天下质量羁系重点产品检验要领标准化技术委员会提出并归口。

本尺度第一法草拟单元:中国磨练检疫科学研究院、中国疾病防备控制中心、国家食品质量平安监视磨练中央、北京市疾病防备控制中心、国度乳制品质量监视磨练中央、浙江省质量手艺监视检测研究院、国度加工食品质量监视磨练中央(广州)。

本尺度第一法重要起草人:宋书锋、鲁杰、安娟、杨大进、李淑娟、张晶、刘艳琴、杨红梅、杨金宝、鄂来明、廖上富、陈小珍、蔡依军、郭新东、吴玉銮。

本尺度第二法草拟单元:中国磨练检疫科学研究院、北京市疾病防备控制中心、国家食品质量平安监视磨练中央、中国疾病防备控制中心、中华人民共和国江苏出入境磨练检疫局。

本尺度第二法重要起草人:彭涛、吴永宁、邵兵、王浩、李晓娟、郭启雷、苗虹、赵云峰、丁涛、李立、蒋本。

本尺度第三法草拟单元:上海市质量监视磨练手艺研究院、国家食品质量平安监视磨练中央、中

国磨练检疫科学研究院。

本尺度第三法重要起草人:巢强国、常宇文、雷涛、陈冬东、赵玉琪、周耀斌、穆同娜、葛宇、

曹程明、张辉、麦成华、曹红。

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1 局限

本标准规定了质料乳、乳制品和露乳制品中三聚氰胺的三种测定要领,即高效液相色谱法(HPLC)、液相色谱-质谱/质谱法(LC-MS/MS)和睦相色谱-量谱联用法[包孕气相色谱-质谱法(GC-MS),气相色谱-质谱/质谱法(GC-MS/MS)]。

本尺度适用于质料乳、乳制品和露乳制品中三聚氰胺的定量测定;液相色谱-质谱/质谱法、气相色谱-质谱(包孕气相色谱-质谱/质谱)法同时适用于质料乳、乳制品和露乳制品中三聚氰胺的定性确证。

本尺度高效液相色谱法的定量限为2 mg/kg,液相色谱-质谱/质谱法的定量限为0.01 mg/kg,气相色谱-质谱法的定量限为0.05 mg/kg(其中气相色谱-质谱/质谱法的定量限为0.005 mg/kg)。

2 规范性援用文件

以下文件中的条目经由过程本尺度的援用而成为本尺度的条目。通常注日期的援用文件,其随后所有的修正单(不包括订正的内容)或修订版均不适用于本尺度,但是,勉励凭据本尺度杀青和谈的各方研讨是不是可运用这些文件的最新版本。通常不注日期的援用文件,其最新版本适用于本尺度。

GB/T 6682 剖析实验室用火规格和实验要领

3 第一法高效液相色谱法(HPLC)

3.1 道理

试样用三氯乙酸溶液-乙腈提取,经阳离子交流固相萃取柱净化后,用高效液相色谱测定,中标法定量。

3.2 试剂取质料

除非另有阐明,所有试剂均为剖析纯,火为GB/T 6682划定的一级火。

3.2.1 甲醇:色谱纯。

3.2.2 乙腈:色谱纯。

3.2.3 氨水:含量为25%~28%。

3.2.4 三氯乙酸。

3.2.5 柠檬酸。

3.2.6 辛烷磺酸钠:色谱纯。

3.2.7 甲醇水溶液:正确量与50 mL 甲醇和50 mL 火,混匀后备用。

3.2.8 三氯乙酸溶液(1%):正确称与10 g 三氯乙酸于1 L 容量瓶中,用火消融并定容至刻度,混匀后备用。

3.2.9 氨化甲醇溶液(5%):正确量与5 mL 氨水和95 mL 甲醇,混匀后备用。

3.2.10 离子对试剂缓冲液:正确称与2.10 g 柠檬酸和2.16 g 辛烷磺酸钠,到场约980 mL 火消融,调治pH 至3.0 后,定容至1L 备用。

3.2.11 三聚氰胺尺度品:CAS 108-78-01,纯度大于99.0%。

3.2.12 三聚氰胺尺度贮备液:正确称与100 mg(准确到0.1 mg)三聚氰胺尺度品于100 mL 容量瓶中,用甲醇水溶液(3.2.7)消融并定容至刻度,配制成浓度为1 mg/mL 的尺度贮备液,于4℃避光生存。

3.2.13 阳离子交流固相萃取柱:混淆型阳离子交流固相萃取柱,基质为苯磺酸化的聚苯乙烯-二乙烯基苯高聚物,60 mg,3 mL,或相称者。运用前顺次用3 mL 甲醇、5 mL 火活化。

3.2.14 定性滤纸。

3.2.15 海砂:化学纯,粒度0.65 mm~0.85 mm,二氧化硅(SiO2)含量为99%。

3.2.16 微孔滤膜:0.2 μm,有机相。

3.2.17 氮气:纯度大于即是99.999%。

3.3 仪器和装备

3.3.1 高效液相色谱(HPLC)仪:配有紫外检测器或二极管阵列检测器。

3.3.2 剖析天平:感量为0.0001 g和0.01 g。

3.3.3 离心机:转速不低于4000 r/min。

3.3.4 超声波水浴。

3.3.5 固相萃取装配。

3.3.6 氮气吹干仪。

3.3.7 涡旋混合器。

3.3.8 具塞塑料离心管:50 mL。

3.3.9 研钵。

3.4 样品处置惩罚

3.4.1 提取

3.4.1.1 液态奶、奶粉、酸奶、冰淇淋和奶糖等

称与2 g(准确至0.01 g)试样于50 mL具塞塑料离心管中,到场15 mL三氯乙酸溶液(3.2.8)和5 mL乙腈,超声提取10 min,再振荡提取10 min后,以不低于4000 r/min离心10 min。上清液经三氯乙酸溶液润湿的滤纸过滤后,用三氯乙酸溶液定容至25 mL,移与5 mL滤液,到场5 mL水混匀后做待净化液。

3.4.1.2 奶酪、奶油和巧克力等

称与2 g(准确至0.01 g)试样于研钵中,到场适当海砂(试样质量的4倍~6倍)研磨成干粉状,转移至50 mL具塞塑料离心管中,用15 mL三氯乙酸溶液(3.2.8)分数次洗濯研钵,洗濯液转入离心管中,再往离心管中到场5 mL乙腈,余下操纵同3.4.1.1中“超声提取10 min,……到场5 mL水混匀后做待净化液”。

注:若样品中脂肪含量较下,能够用三氯乙酸溶液饱和的正己烷液-液分派除脂后再用SPE柱净化。

3.4.2 净化

将3.4.1中的待净化液转移至固相萃取柱(3.2.13)中。顺次用3 mL火和3 mL甲醇洗涤,抽至近干后,用6 mL氨化甲醇溶液(3.2.9)洗脱。全部固相萃取历程流速不超过1 mL/min。洗脱液于50℃下用氮气吹干,残留物(相当于0.4 g样品)用1 mL活动相定容,涡旋混淆1 min,过微孔滤膜(3.2.16)后,供HPLC测定。

3.5 高效液相色谱测定

3.5.1 HPLC 参考前提

a) 色谱柱:C8柱,250 mm×4.6 mm(i.d.),5 μm,或相称者;

C18柱,250 mm×4.6 mm(i.d.),5 μm,或相称者。

b) 活动相:C8柱,离子对试剂缓冲液(3.2.10)-乙腈(85+15,体积比),混匀。

C18柱,离子对试剂缓冲液(3.2.10)-乙腈(90+10,体积比),混匀。

c) 流速:1.0 mL/min。

d) 柱温:40℃。

GB/T 22388—2008

e) 波长:240 nm。

f) 进样量:20 μL。

3.5.2 尺度曲线的绘制

用活动相将三聚氰胺尺度贮备液逐级稀释获得的浓度为0.8、2、20、40、80 μg/mL 的尺度工作液,浓度由低到高进样检测,以峰面积-浓度作图,获得尺度曲线回归方程。基质婚配加标三聚氰胺的样品HPLC 色谱图拜见附录A 中的图A.1。

3.5.3 定量测定

待测样液中三聚氰胺的相应值应正在尺度曲线线性范围内,凌驾线性局限则应稀释后再进样剖析。

3.5.4 效果盘算

试样中三聚氰胺的含量由色谱数据处理软件或按式(1)盘算得到:

A × c × V×1000

X= × f ……………………(1)

As × m×1000

式中:

X —— 试样中三聚氰胺的含量,单元为毫克每公斤(mg/kg);

A —— 样液中三聚氰胺的峰面积;

c —— 标准溶液中三聚氰胺的浓度,单元为微克每毫升(μg/mL);

V —— 样液终究定容体积,单元为毫升(mL);

As —— 标准溶液中三聚氰胺的峰面积;

m —— 试样的质量,单元为克(g);

f —— 稀释倍数。

3.6 空缺实行

除不称取样品中,均按上述测定前提和步调停止。

3.7 要领定量限

本要领的定量限为2 mg/kg。

3.8 回收率

正在增加浓度2 mg/kg~10 mg/kg浓度范围内,回收率正在80%~110%之间,相对标准偏差小于10%。

3.9 许可差

正在重复性条件下得到的两次自力测定效果的绝对差值不得凌驾算术平均值的10%。

4 第二法液相色谱-质谱/质谱法(LC-MS/MS)

4.1 道理

试样用三氯乙酸溶液提取,经阳离子交流固相萃取柱净化后,用液相色谱-质谱/质谱法测定和确证,中标法定量。

GB/T 22388—2008

4.2 试剂取质料

除非另有阐明,所有试剂均为剖析纯,火为GB/T 6682划定的一级火。

4.2.1 乙酸。

4.2.2 乙酸铵。

4.2.3 乙酸铵溶液(10 mmol/L):正确称与0.772 g 乙酸铵于1 L 容量瓶中,用火消融并定容至刻度,

混匀后备用。

4.2.4 其他同3.2。

4.3 仪器和装备

4.3.1 液相色谱-质谱/质谱(LC-MS/MS)仪:配有电喷雾离子源(ESI)。

4.3.2 其他同3.3。

4.4 样品处置惩罚

4.4.1 提取

4.4.1.1 液态奶、奶粉、酸奶、冰淇淋和奶糖等

称与1 g(准确至0.01 g)试样于50 mL具塞塑料离心管中,到场8 mL三氯乙酸溶液(3.2.8)和2 mL乙腈,超声提取10 min,再振荡提取10 min后,以不低于4000 r/min离心10 min。上清液经三氯乙酸溶液润湿的滤纸过滤后,做待净化液。

4.4.1.2 奶酪、奶油和巧克力等

称与1 g(准确至0.01 g)试样于研钵中,到场适当海砂(试样质量的4倍~6倍)研磨成干粉状,转移至50 mL具塞塑料离心管中,到场8 mL三氯乙酸溶液(3.2.8)分数次洗濯研钵,洗濯液转入离心管中,再加入2mL乙腈,余下操纵同4.4.1.1中“超声提取10 min,……做待净化液”。

注:若样品中脂肪含量较下,能够用三氯乙酸溶液饱和的正己烷液-液分派除脂后再用SPE柱净化。

4.4.2 净化

将4.4.1中的待净化液转移至固相萃取柱(3.2.13)中。顺次用3 mL火和3 mL甲醇洗涤,抽至近干后,用6 mL氨化甲醇溶液(3.2.9)洗脱。全部固相萃取历程流速不超过1 mL/min。洗脱液于50℃下用氮气吹干,残留物(相当于1 g试样)用1 mL活动相定容,涡旋混淆1 min,过微孔滤膜(3.2.16)后,供LC-MS/MS测定。

4.5 液相色谱-质谱/量谱测定

4.5.1 LC 参考前提

a) 色谱柱:强阳离子交流取反相C18混淆填料,混淆比例(1:4),150 mm×2.0 mm(i.d.),5 μm,或相称者。

b) 活动相:等体积的乙酸铵溶液(4.2.3)和乙腈充裕混淆,用乙酸调治至pH=3.0后备用。

c) 进样量:10 μL。

d) 柱温:40℃。

e) 流速:0.2 mL/min。

4.5.2 MS/MS 参考前提

a) 电离体式格局:电喷雾电离,正离子。

b) 离子喷雾电压:4 kV。

c) 雾化气:氮气,40 psi。

d) 枯燥气:氮气,流速10 L/min,温度350℃。

e) 碰撞气:氮气。

f) 分辨率:Q1(单元)Q3(单元)。

g) 扫描形式:多回响反映监测(MRM),母离子m/z 127,定量子离子m/z 85,定性子离子m/z 68。

h) 停止工夫:0.3 s。

i) 裂解电压:100 V。

j) 碰撞能量:m/z 127>85 为20 V,m/z 127>68 为35 V。

4.5.3 尺度曲线的绘制

与空缺样品根据4.4 处置惩罚。用所得的样品溶液将三聚氰胺尺度贮备液(3.2.12)逐级稀释获得的浓度为0.01、0.05、0.1、0.2、0.5 μg/mL 的尺度工作液,浓度由低到高进样检测,以定量子离子峰面积-浓度作图,获得尺度曲线回归方程。基质婚配加标三聚氰胺的样品LC-MS/MS 多回响反映监测质量色谱图拜见附录A 中的图A.2。

4.5.4 定量测定

待测样液中三聚氰胺的相应值应正在尺度曲线线性范围内,凌驾线性局限则应稀释后再进样剖析。

4.5.5 定性判断

根据上述前提测定试样和尺度事情溶液,若是试样中的质量色谱峰保存工夫取尺度事情溶液一

致(转变局限正在±2.5%以内);样品中目的化合物的两个子离子的相对歉度取浓度相称标准溶液的相对歉度同等,相对歉度偏向不超过表1的划定,则可判定样品中存在三聚氰胺。

表1 定性离子相对歉度的最大许可偏向

相对离子歉度>50% >20%至50% >10%至20% ≤10%

许可的相对偏向±20% ±25% ±30% ±50%

4.5.6 效果盘算

同3.5.4。

4.6 空缺实行

除不称取样品中,均按上述测定前提和步调停止。

4.7 要领定量限

本要领的定量限为0.01 mg/kg。

4.8 回收率

正在增加浓度0.01 mg/kg~0.5 mg/kg浓度范围内,回收率正在80%~110%之间,相对标准偏差小于10%。

4.9 许可差

正在重复性条件下得到的两次自力测定效果的绝对差值不得凌驾算术平均值的15%。

5 第三法气相色谱-量谱联用法(GC-MS和GC-MS/MS)

5.1 道理

试样经超声提取、固相萃取净化后,停止硅烷化衍生,衍生产品接纳挑选离子监测量谱扫描形式

(SIM)或多回响反映监测量谱扫描形式(MRM),用化合物的保存工夫和量谱碎片的歉度比定性,中标法定量。

5.2 试剂取质料

除非另有阐明,所有试剂均为剖析纯,火为GB/T 6682划定的一级火。

5.2.1 吡啶:优级纯。

5.2.2 乙酸铅。

5.2.3 衍生化试剂:N,O-单三甲基硅基三氟乙酰胺(BSTFA)+三甲基氯硅烷(TMCS)(99+1),色谱纯。

5.2.4 乙酸铅溶液(22 g/L):与22 g 乙酸铅用约300 mL 火消融后定容至1 L。

5.2.5 三聚氰胺标准溶液:正确吸收三聚氰胺尺度贮备液(3.2.12)1 mL 于100 mL 容量瓶中,用甲醇定容至刻度,此标准溶液1 mL 相当于10 μg 三聚氰胺尺度品,于4℃冰箱内贮存,有效期3 个月。

5.2.6 氩气:纯度大于即是99.999%。

5.2.7 氦气:纯度大于即是99.999%。

5.2.8 其他同3.2。

5.3 仪器和装备

5.3.1 气相色谱-质谱(GC-MS)仪:配有电子轰击电离离子源(EI)。

5.3.2 气相色谱-质谱/质谱(GC-MS/MS)仪:配有电子轰击电离离子源(EI)。

5.3.3 电子恒温箱。

5.3.4 其他同3.3。

5.4 样品处置惩罚

5.4.1 GC-MS法

5.4.1.1 提取

5.4.1.1.1 液态奶、奶粉、酸奶和奶糖等

称与5 g(准确至0.01 g)样品于50 mL具塞比色管,到场25 mL三氯乙酸溶液(3.2.8),涡漩振荡30 s,再加入15 mL三氯乙酸溶液,超声提取15 min,到场2 mL乙酸铅溶液(5.2.4),用三氯乙酸溶液定容至刻度。充裕混匀后,转移上层提取液约30 mL至50 mL离心试管,以不低于4000 r/min离心10 min。上清液待净化。

5.4.1.1.2 奶酪、奶油和巧克力等

称与5 g(准确至0.01g)样品于50 mL具塞比色管中,用5 mL热水消融(需要时可恰当加热),再加入20 mL三氯乙酸溶液(3.2.8),涡漩振荡30 s,再加入15 mL三氯乙酸溶液超声提取及以下操纵同

5.4.1.1.1。若样品中脂肪含量较下,能够先用乙醚脱脂后再用三氯乙酸溶液提取。

5.4.1.2 净化正确移与5 mL的待净化滤液至固相萃取柱(3.2.13)中。再用3 mL火、3 mL甲醇淋洗,弃淋洗液,

抽近干后用3 mL氨化甲醇溶液(3.2.9)洗脱,收集洗脱液,50℃下氮气吹干。

5.4.2 GC-MS/MS法

5.4.2.1 奶粉、奶酪、奶油、巧克力和奶糖等

称与0.5 g(准确至0.01 g)试样,到场5 mL甲醇水溶液(3.2.7),涡旋混匀2 min后,超声提取15 min ~20

min,以不低于4000 r/min离心10 min,取上清液200 μL用微孔滤膜(3.2.16)过滤,50℃下氮气吹干。

5.4.2.2 液态奶和酸奶等

称与1 g(准确至0.01 g)试样,到场5 mL甲醇,涡旋混匀2 min后,超声提取及以下操纵同5.4.2.1。

5.4.3 衍生化

与上述氮气吹干残留物,到场600 μL的吡啶和200 μL衍生化试剂(5.2.3),混匀,70℃回响反映30 min后,供GC-MS或GC-MS/MS法定量检测或确证。

5.5 气相色谱-量谱测定

5.5.1 仪器参考前提

5.5.1.1 GC-MS参考前提

a) 色谱柱:5%苯基二甲基聚硅氧烷石英毛细管柱,30 m×0.25 mm(i.d.)×0.25 μm,或相称者。

b) 流速:1.0 mL/min。

c) 顺序升温:70℃连结1 min,以10℃/min 的速度升温至200℃,连结10 min。

d) 传输线温度:280℃。

e) 进样口温度:250℃。

f) 进样体式格局:不分流进样。

g) 进样量:1 μL。

h) 电离体式格局:电子轰击电离(EI)。

i) 电离能量:70 eV。

j) 离子源温度:230℃。

k) 扫描形式:挑选离子扫描,定性离子m/z 99、171、327、342,定量离子m/z 327。

5.5.1.2 GC-MS/MS 参考前提

a) 色谱柱:5%苯基二甲基聚硅氧烷石英毛细管柱,30 m×0.25 mm(i.d.)×0.25 μm,或相称者。

b) 流速:1.3 mL/min。

c) 顺序升温:75℃连结1 min,以30℃/min 的速度升温至220℃,再以5℃/min 的速度升温至250℃,

连结2 min。

d) 进样口温度:250℃。

e) 接口温度:250℃。

f) 进样体式格局:不分流进样。

g) 进样量:1 μL。

h) 电离体式格局:电子轰击电离(EI)。

i) 电离能量:70 eV。

j) 离子源温度:220℃。

k) 四级杆温度:150℃。

l) 碰撞气:氩气,1.8 mTorr。

m) 碰撞能量:15 V。

n) 扫描体式格局:多回响反映监测(MRM),定量离子m/z 342>327,定性离子m/z 342>327,342>171。

5.5.2 尺度曲线的绘制

5.5.2.1 GC-MS法

正确吸收三聚氰胺标准溶液(5.2.5)0、0.4、0.8、1.6、4、8、16 mL 于7 个100 mL 容量瓶中,用甲醇稀释至刻度。各与1 mL 用氮气吹干,根据5.4.3 步调衍生化。配制成衍生产品浓度离别为0、0.05、0.1、0.2、0.5、1、2 μg/mL 的标准溶液。回响反映液供GC-MS 测定。以尺度事情溶液浓度为横坐标,定量离子质量色谱峰面积为纵坐标,绘制尺度事情曲线。标准溶液的GC-MS 挑选离子质量色谱图拜见附录A 中的图A.3,三聚氰胺衍生物挑选离子质谱图拜见附录A 中的图A.4。

5.5.2.2 GC-MS/MS法

正确吸收三聚氰胺标准溶液(5.2.5)0、0.04、0.08、0.4、0.8、4、8 mL离别于7个100 mL容量瓶中,用甲醇稀释至刻度。各与1 mL用氮气吹干,根据5.4.3步调衍生化。配制成衍生化产品浓度离别为0、0.005、0.01、0.05、0.1、0.5、1 μg/mL的标准溶液。回响反映液供GC-MS/MS测定。以尺度事情溶液浓度为横坐标,定量离子质量色谱峰面积为纵坐标,绘制尺度事情曲线。标准溶液的 GC-MS/MS多回响反映监测质量色谱图拜见附录A中的图A.5。

5.5.3 定量测定

GB/T 22388—2008

待测样液中三聚氰胺的相应值应正在尺度曲线线性范围内,凌驾线性局限则应对净化液稀释,从新衍

生化后再进样剖析。

5.5.4 定性判断

5.5.4.1 GC-MS 法

以尺度样品的保存工夫和监测离子(m/z 99、171、327 和342)定性,待测样品中4 个离子(m/z

99、171、327 和342)的歉度比取尺度品的雷同离子歉度比相差不大于20%。

5.5.4.2 GC-MS/MS 法

以尺度样品的保存工夫和多回响反映监测离子(m/z 342>327、342>171)定性,其他定性判断原则

同4.5.5。

5.5.5 效果盘算

同3.5.4。

5.6 空缺实行

除不称取样品中,均按上述测定前提和步调停止。

5.7 要领定量限

本要领中,气相色谱-质谱法(GC-MS法)的定量限为0.05 mg/kg,气相色谱-质谱/质谱法(GC-MS/MS

法)的定量限为0.005 mg/kg。

5.8 回收率

GC-MS法:正在增加浓度0.05 mg/kg~2 mg/kg浓度范围内,回收率正在70%~110%之间,相对尺度偏偏

差小于10%。

GC-MS/MS法:正在增加浓度0.005 mg/kg~1 mg/kg浓度范围内,回收率正在90%~105%之间,相对标

准偏向小于10%。

5.9 许可差

正在重复性条件下得到的两次自力测定效果的绝对差值不得凌驾算术平均值的15%。


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